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bet365的体育投注_365体育彩票投注_bet.365体育在线投注网址小课堂:无血清培养基的使用方法

来源:未知?????时间:2019-09-23 08:35?????浏览次数: 次

目前,血清仍是动物细胞培养中基本的的添加物,尤其是在原代培养或者细胞生长状况不良时,常常会先使用有血清的培养液进行培养,待细胞生长旺盛以后,再换成无血清培养液。细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程,一般要逐步降低血清浓度,从10%减少到5%,3%,1%,直至无血清培养。在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化,是否有部分细胞死亡,存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。在实验后这些细胞一般不再继续保留,很少有细胞能够长期培养于无血清培养基而不发生改变的。
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为了使细胞适应无血清培养,关键的是使所培养细胞:?
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●处于对数生长中期?
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●>90% 活细胞率?
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●适应时以较高的起始细胞接种
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有两种方法使细胞适应无血清培养基:
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1. 直接适应——细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基中。 ?一些类型细胞可直接从包含血清的培养基适应无血清培养基。

●对于直接适应,接种细胞密度应该:2.5×105~3.5×105细胞/ml。

●当细胞密度达到1×106~3×106细胞/ml时,传代培养细胞。

●当细胞密度在培养4到7天后达到2×106~4×106细胞/ml时,细胞完全适应了无血清培养基。

●每隔3~5天,当细胞密度达到1×106~3×106细胞/ml,细胞活率在90%时,贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。
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2. 连续适应——分好几步把细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基(SFM)中,与直接适应相比较,连续适应趋向对于细胞更加温和一些。?
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●以2倍正常接种密度接种生长活跃的细胞培养物到75%有血清培养基:25%SFM 混合培养基中,传代培养。?
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●当细胞密度>5×105细胞/ml时,以2×105到3×105细胞/ml细胞密度,在有血清培养基:SFM为50∶50的混合培养基中传代培养。?
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●以2×106到3×106细胞/ml细胞密度,25%有血清培养基和75% SFM中传代培养。?
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●当细胞密度达到1×106到3×106细胞/ml(接种后4到6天),在100%SFM培养基中传代培养。?
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●每隔3到5天,当细胞密度达到1×106到3×106细胞/ml,细胞活率在90%时,贮备的适应了无血清培养基的细胞培养物应该再次传代培养。?
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建议备份前一次混合培养的培养物,直到每一次细胞适应了新的混合培养基。每一次减少血清前,可能需要在SFM/有血清混合培养基中进行几次传代。
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